①根瘤的采集和分離  挖取帶有根瘤的根系，裝入塑料袋內以備分離根瘤菌。用流水反復沖洗根瘤，直至無附著土壤，吸干水分。在無菌室內將根瘤置入75%酒精中浸3～5min，然后移到0.1%升汞中消毒3～5min，再用無菌水沖洗根瘤，除去殘存的消毒液。切開根瘤，用接種環直接蘸取瘤汁在剛果紅YMA平板上劃線。從根瘤中分離根瘤菌的培養基為酵母甘露醇瓊脂，簡稱YMA。培養基成分為：磷酸氫二鉀0.5g，硫酸鎂0.2g，氯化鈉0.lg，甘露醇10g，酵母膏lg，瓊脂18～20g，水l000mL。高壓滅菌(1kg/cm2) 30min。剛果紅瓊脂配方：在1000mLYMA培養基中加入1%剛果紅溶液2.5mL。剛果紅可在分裝試管前加入，也可以在溶化的培養基中加入滅菌的剛果紅溶液。

   ②初步鑒定  由根瘤里分離出的培養物，在剛果紅YMA平板上做初步鑒定，以確定是否是根瘤菌。根瘤菌菌落特征為：菌落黏稠，乳白色，在剛果紅YMA平板上不吸色或早期不吸色，而其他雜菌則易吸色。28～30℃恒溫培養，快生型大豆根瘤菌3～5d菌苔豐滿；慢生型大豆根瘤菌則需5～7d。選取典型菌落在剛果紅瓊脂平板上進一步劃線純化。純化后的菌種進行編號登記，并記錄所分離的大豆品種、土壤、分離日期和分離人等，然后移入YMA斜面培養后4℃冰箱保存。